Ảnh hưởng của Fucoidan đến tăng trưởng khối u trên chuột

Mô tả:

Thử nghiệm đánh giác hoạt động chống ung khối u của việc uống Fucoidan chiết xuất từ Cladosiphon Okamuranus cho khối u trên chuột (với mã Colon 26). Nguyên liệu sử dụng gồm:

Fucoidan phân tử thấp (LMWF: 6,5-40 kDa)

Fucoidan phân tử trung bình (IMWF: 110-138 kDa)

Fucoidan phân tử cao (HMWF: 300-330 kDa)

Nhóm IMWF có sự kiềm hãm sự tăng trưởng khối u đáng kể. Nhóm LMWF và HMWF kéo dài thời gian sống trung bình đáng kể. Thời gian sống trung bình các nhóm LMWF, IMWF, HMWF tương ứng là 46, 40, 43 ngày. Nhóm dùng Fucoidan còn tăng tỉ lệ tế bào ung thư chết tự nhiên. Ngoài ra, kết quả thí nghiệm cho thấy Fucoidan tác động tăng miễn dịch đường ruột đáng kể.

1. Giới thiệu:

Fucoidan là một chuỗi polysaccharide sulfate phức tạp được tìm thấy trong một số loại tảo nâu ăn được. Cấu trúc và thành phần Fucoidan khác nhau giữa các loại rong nâu khác nhau, tuy nhiên, các hợp chất chủ yếu là I-fucose và sulfate cùng với một lượng nhỏ d-galactose, D-mannose, D-xylose và acid uronic. Nhiều báo cáo cho thấy Fucoidan có khả năng chống virus, chống đông máu, chống oxy hóa, chống viêm và các hiệu ứng miễn dịch

Các hoạt động chống khối u của Fucoidan cũng được quan sát thấy trong cơ thể và trong ống nghiệm. Các cơ chế cơ bản về hoạt động chống khối u của Fucoidan đã được báo cáo bao gồm các cảm ứng quá trình apoptosis, sự đàn áp của newvascularity và kích hoạt miễn dịch tế bào trung gian. Đặc biệt, Fucoidan làm tăng hoạt động của tế của tế bào T-cells trong cơ thể. Fucoidan thúc đẩy sự tăng trưởng của tế bào bạch cầu. Fucoidan cũng kích thích việc hình thành interleuken (IL) và interferon trong ống nghiệm.

Những báo cáo trước đây cho thấy rằng Fucoidan là tác nhân chống ung thư. Vài báo cáo đã chỉ ra rằng các hoạt tính sinh học của Fucoidan bị ảnh hưởng bởi các biến. Sự khác biệt về trọng lượng phân tử của Fucoidan ảnh hưởng đến các việc chống neovascular của Fucoidan và thể hiện hiệu ứng khác nhau trong tế bào NK của chuột.

Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã kiểm tra tác động của việc uống Fucoidan có trọng lượng phân tử khác nhau chiết xuất từ Cladosiphon okamuranus đến việc tăng trưởng khối u và thời gian sống trên chuột.

2.Kết quả và thảo luận:

2.1. Ảnh hưởng của việc uống Fucoidan trong mô hình Colon 26 – khối u trên chuột

2.1.1 Tác động Fucoidan đối với khối u tăng trưởng

Những con chuột được cho ăn Fucoidan khoảng 5g/ngày. So sánh trọng lượng khối u theo trọng lượng phân tử Fucoidan được tiến hành, kết quả được thể hiện trong hình 1. Trọng lượng khối u giảm đáng kể trong Fucoidan với nhóm uống Fucoidan có trọng lượng phân tử trung bình (IMWF: 110-138 kDa) so với nhóm đối chứng (nhóm kiểm soát: 0,33±0,17g, IMWF: 0,12±0,16g, p<0,05). Trọng lượng khối u được giảm ở cả nhóm Fucoidan trọng lượng phân tử thấp (Nhóm LMWF: 6,5-40kDa, 0,12±0,16) và Fucoidan cao phân tử (HMWF: 300-330kDa, 0,08±0,09g). Tuy nhiên, cũng không có sự thay đổi đáng kể so với nhóm đối chứng.

fucoidan giảm kích thước khối u

Hình 1

Kiểm tra ảnh hưởng của sự thay đổi mô bệnh học IMWF trong mô khối u bằng hematoxylin – eosin (HE). Trong nhóm IMWF và nhóm kiểm soát, nhiều phân chia tế bào đã quan sát được. Số lượng phân chia tế bào trong mỗi nhóm được thể hiện trong bảng 1. Số lượng phân chia tế bào trong nhóm IMWF đã giảm đáng kể so với nhóm đối chứng. Chúng tôi cũng xem xét những ảnh hưởng của IMWF trên apoptosis bằng cách sử dụng thiết bị đầu cuối deoxynucleotidyl transferase qua trung gian deoxyuridine triphosphatate – biotin nick (Tunel). Tế bào tunel+ đã được quan sát ở cả 2 nhóm IMWF và nhóm kiểm soát. Số lượng tế bào Tunel trong nhóm IMWF và nhóm kiểm soát trình bày trong bảng 1. Số lượng tế bào Tunel- trong nhóm IMWF đã tăng nhẹ so với nhóm đối chứng.

fucoidan giảm kích thước khối u

Bảng 1: Fucoidan có ảnh hưởng tích cực đến số lượng tế bào phân chia và triphosphatate-biotin nick trong khối u.

2.1.2. Tác động của Fucoidan về thời gian sống

Những ảnh hưởng của Fucoidan trên thời gian tồn tại của chuột mang khối u được thể hiện trong hình 2. Thời gian tồn tại của những con chuột trong nhóm LMWF, IMWF, HMWF được kéo dài. Thời gian tồn tại của nhóm LMWF và HMWF đã tăng lên đáng kể so với nhóm kiểm soát ( kiểm tra log-rank, p<0,05). Thời gian tồn tại trung bình là 23 ngày ở nhóm kiểm soát, 46 ngày ở nhóm LMWF, 40 ngày ở nhóm IMWF và 43 ngày ở nhóm HMWF)

fucoidan giảm kích thước khối u

Hình 2: Tác động của uống fucoidan về thời gian tồn tại. n = 4 trong mỗi nhóm. p <0,05 so với nhóm kiểm soát trong các nhóm LMWF và HMWF bởi Longrank thử nghiệm.

Những báo cáo trước đây cho thấy Fucoidan có thể chống khôi u thông qua một số cơ chế. Fucodian tác dụng chống neovascular. Fucoidan ức chế sự bám dính của các tế bào khối u vào các tế bào bình thường.Fucoidan gây ra quá trình apoptosis thông qua ti thể trung gian làm tế bào ung thư tự tiêu diệt. Trong kết quả nghiên cứu này của chúng tôi, Fucoidan tăng nhẹ số lượng tế bào Tunel+ trong cơ thể. Ảnh hưởng ức chế của Fucoidan đối với sự phát triển của khối u. Ngoài ra, Fucoidan làm tăng số lượng tế bào interkinesis. Fucoidan giảm đáng kể số lượng tế bào phân chia trong cơ thể. Kết quả cho thấy rằng Fucodian điều biến được chu kỳ tế bào.

Kết quả cho thấy sự khác biệt trọng lượng phân tử Fucoidan đối với tác dụng chống khối u. Fucoidan không bị phân hủy bởi các men tiêu hóa của con người. Chúng tôi kiểm tra sự hấp thụ Fucoidan trong của ruột non chuột. Kết quả cho thấy không có số lượng Fucoidan nào được hấp thụ ở ruột non chuột. Những hiện tượng này cho thấy hoạt tính sinh học của Fucoidan xảy ra trong cơ thể không liên quan đến sự hấp thụ ở ruột. Các hoạt động chống khối u của Fucoidan quan sát được có thể là kết quả của hành động gián tiếp như kích thích hệ miễn dịch đường ruột. Kết quả kích thích phụ thuộc vào trọng lượng phân tử của Fucoidan

2.2. Tác động của uống Quản lý Fucoidan trên lách NK quần thể di động

Những tác động của uống của IMWE và HMWF trên lách quần thể tế bào NK chuột được thể hiện trong hình 3 . Uống của IMWF ( 4,6 ± 0,4 %) và HMWF (5,2 ± 0,5% ) tăng kích thước của quần thể tế bào NK trong mô lách so với quan sát trong nhóm chứng ( 4,1 ± 0,2 %). Có sự khác biệt đáng kể giữa các nhóm HMWF và nhóm kiểm soát .

fucoidan giảm kích thước khối u

Hình 3: Những tác động của uống của fucoidan trên chuột giết tự nhiên lách (NK ) quần thể tế bào . Các dữ liệu đại diện cho giá trị trung bình ± S.D. n = 3 của mỗi nhóm. * P <0,05 so với nhóm kiểm soát, kiểm tra Tukey – Kramer .

Một số báo cáo đã chỉ ra rằng Fucoidan kích thích hoạt động của tế bào NK trong cơ thể [ 16,22,23 ] . Báo cáo trước đây cũng đã chỉ ra rằng fucoidan chiết xuất từ ​​Cladosiphon okamuranus tăng kích thước của quần thể tế bào NK . Trong nghiên cứu này , dân số của các tế bào NK đã tăng đáng kể ở nhóm HMWF so với quan sát trong nhóm đối chứng. Shimizu et al. báo cáo rằng cao trọng lượng phân tử Fucoidan chiết xuất từ ​​Cladosiphon okamuranus ( 200-300 kDa ) thúc đẩy tăng lớn hơn trong tỷ lệ của các tế bào gây độc tế bào T chuột hơn trung bình (2-3 kDa ) hoặc thấp ( 0,5-1 kDa ) trọng lượng phân tử Fucoidan [18]. Họ dùng Fucoidan bởi có chứa 5 % fucoidan trong phòng thí nghiệm nhai cho 70 ngày. Trong nghiên cứu này , chúng tôi cũng dùng cùng một lượng fucoidan trong 70 ngày . Kết quả của chúng tôi cho thấy ăn Fucoidan cũng làm tăng dân số của các tế bào NK trong chuột lách . Các tế bào NK có khả năng nhận biết và tiêu diệt một loạt các tế bào bất thường , bao gồm cả tế bào ung thư , mà không gây tổn hại các tế bào khỏe mạnh và tự bình thường [24] . Trong cơ thể và trong các nghiên cứu trong ống nghiệm đã chỉ ra rằng các tế bào NK có thể loại bỏ tế bào ung thư [25]. Kết quả của chúng tôi cho thấy rằng một trong những cơ chế chống khối u của fucoidan chiết xuất từ ​​Cladosiphon okamuranus có thể làm trung gian tăng hoạt động của tế bào NK . Kết quả của chúng tôi cũng chỉ ra rằng sự khác biệt về trọng lượng phân tử của fucoidan có thể ảnh hưởng đến hoạt động của tế bào NK trong cơ thể. Tiếp tục nghiên cứu phải được tiến hành để tìm hiểu mối quan hệ giữa trọng lượng phân tử của fucoidan và hoạt động của tế bào NK trong cơ thể.

2.3. Tác động của uống Quản lý Fucoidan trên khối u đang phát triển và huyết thanh Cytokine trong MYD -88 Vòng đấu loại chuột

Tiết lộ mối quan hệ giữa tác dụng chống khối u của fucoidan và miễn dịch bẩm sinh , chúng tôi đã kiểm tra tác dụng chống khối u của fucoidan sử dụng sự khác biệt dòng tủy phản ứng chính gen -88 ( MYD -88 ) con chuột loại trực tiếp . Các kết quả được trình bày trong bảng 2 . Không có thay đổi đáng kể về trọng lượng khối u đã được quan sát thấy trong nhóm HMWF/Myd-88 so với nhìn thấy trong nhóm control/Myd-88 . Không có thay đổi được quan sát thấy trong huyết thanh IL-2 cấp độ giữa các nhóm HMWF/Myd-88 và control/Myd-88 . Huyết thanh IL- 10 cấp độ trong nhóm HMWF/Myd-88 đã tăng nhẹ so với quan sát trong nhóm control/Myd-88 .

fucoidan giảm kích thước khối u

Bảng 2: Ảnh hưởng của uống của fucoidan trên phát triển khối u và mức độ cytokine huyết thanh trong MYD -88 chuột loại trực tiếp . Dữ liệu đại diện cho có nghĩa là ± S.D. n = 5 trong mỗi nhóm. * P <0,05 so với nhóm control/Myd-88 , t-test Welch.

Báo cáo trước đây đã chỉ ra rằng các hoạt tính sinh học của fucoidan kích hoạt hệ miễn dịch bẩm sinh [ 4,16,17 ] . Sự hoạt hóa miễn dịch bẩm sinh là điều cần thiết cho sự hoạt hóa miễn dịch thích ứng [26]. Đặc biệt , các thụ điện thoại như ( TLR ) trên bề mặt của các bào quan trong tế bào nhận ra các cấu trúc cụ thể của vi khuẩn, virus và nấm [27]. Bộ chuyển đổi phân tử như MYD -88 và TIR miền có chứa bộ chuyển đổi gây interferon – β ( TRIF ) đóng vai trò quan trọng trong việc kích thích sản xuất các cytokine qua TLRs [ 28,29 ] . Trong kết quả của chúng tôi , fucoidan trưng bày không có tác dụng chống khối u trong MYD -88 chuột loại trực tiếp . Kết quả này chỉ ra rằng tác dụng chống khối u của fucoidan phát sinh từ MYD -88 đường trong cơ thể.

Huyết thanh IL- 2 cấp trong nhóm HMWF/Myd-88 không thay đổi so với quan sát trong nhóm control/Myd-88 . Huyết thanh IL- 10 cấp độ trong nhóm HMWF/Myd-88 tăng so với quan sát trong nhóm control/Myd-88 . TLR -4 kích thích sản xuất cytokine qua cả hai đường dẫn tín hiệu MYD -88 và TRIF [29]. Kết quả của chúng tôi cho thấy tăng nồng độ cytokine huyết thanh có thể là kết quả của con đường TRIF phụ thuộc , không phải là -88 phụ thuộc vào MYD đường . Theo chúng tôi biết , không có báo cáo điều tra các mối quan hệ giữa TLRs và fucoidan . Kết quả của chúng tôi cho thấy rằng fucoidan kích thích TLR -4 trong các mô hình khối u chuột . Để hiểu được cơ chế cơ bản tác dụng chống khối u của fucoidan , nghiên cứu sâu hơn tập trung vào TLRs phải được tiến hành cả trong cơ thể và trong ống nghiệm.

Một số báo cáo đã chỉ ra rằng các hoạt tính sinh học của fucoidan phụ thuộc vào trọng lượng phân tử của fucoidan [ 18,30,31 ] . Yang và các cộng sự . mô tả các hoạt động chống ung thư của fucoidan chiết xuất từ ​​Undaria pinnatifida . Kết quả của họ chỉ ra rằng 490 kDa của fucoidan trưng bày các hoạt động chống ung thư hiệu quả hơn fucoidan tự nhiên ( 5100 kDa ) hoặc trọng lượng phân tử thấp Fucoidan ( 260 kDa ) [ 30 ] . Shimizu et al. báo cáo rằng cao trọng lượng phân tử Fucoidan thúc đẩy tăng lớn hơn trong tỷ lệ tế bào T độc tế bào chuột hơn trung bình hoặc thấp trọng lượng phân tử Fucoidan [18]. Công viên và các cộng sự . báo cáo rằng cao trọng lượng phân tử Fucoidan tăng viêm , trong khi thấp trọng lượng phân tử fucoidan cho thấy các hoạt động chống viêm thông qua sự ức chế các phản ứng miễn dịch Th1 qua trung gian [ 31 ] . Kết quả của chúng tôi chứng minh sự hiện diện của các hoạt động chống khối u HMWF sau khi kích hoạt của miễn dịch bẩm sinh trong cơ thể. Để hiểu được cơ chế của hoạt động chống khối u trưng bày bởi IMWF và LMWF , nghiên cứu sâu hơn phải được tiến hành .

Trong nghiên cứu này , chúng tôi sử dụng Fucoidan mà không thay đổi thành phần và mức độ sulfat trong quá trình điều trị thủy nhiệt . Bilan et al. báo cáo thậm chí là một loài tảo đơn có thể chứa , ít nhất là với số lượng nhỏ , một số polysaccharides sulfate khác nhau trong cấu trúc phân tử [ 32 ] . Kết quả này cho thấy phân đoạn dầu thô ” fucoidans ” có thể cung cấp cho polysaccharides không Fucoidan. Một số kết quả chỉ ra hoạt động sinh học của fucoidan được phụ thuộc vào không chỉ trọng lượng phân tử của họ mà còn tảo biển và các thành phần có nguồn gốc của họ [ 5,6 ] . Khi chúng ta so sánh các hoạt động sinh học của polysaccharides như Fucoidan , không chỉ là trọng lượng phân tử mà còn là rong biển có nguồn gốc và tác phẩm phải được xem xét .

3 . Phần thực nghiệm

3.1. Động vật

Chuột BALB / c (4 – hoặc 5 tuần tuổi , nữ) được mua từ Nhật Bản CREA ( Osaka, Nhật Bản ) . MYD -88 loại trực tiếp những con chuột ( BALB / c nền, 4 tuần tuổi , nữ) được mua từ phương Đông BioService , Inc (Kyoto, Nhật Bản ) . Tất cả các con chuột này được duy trì trong điều kiện thông thường. Việc sử dụng những con chuột và các thủ tục được sử dụng trong nghiên cứu này đã được sự chấp thuận của Ủy ban Nghiên cứu động vật của Đại học Tottori .

3.2. Thuốc thử

Fucoidan ( nhóm HMWF ; Mw 300-330 kDa , No.1010 rất nhiều ) từ Cladosiphon okamuranus được cung cấp bởi Thủy sản Kimuraya Inc ( Tottori , Nhật Bản ) . Teruya et al. báo cáo rằng fucoidan từ Cladosiphon okamuranus gồm l- fucose , d – xylose , acid d – gulucuronic với tỷ lệ 4.0:0.03:1.0 [ 33 ] . Mức độ sulfat (DS ) được đánh giá bằng phương pháp phân tích nguyên tố là 0,33-0,34 . Mức độ acetyl hóa (DA) được xác định bằng phương pháp phân tích 1H NMR là 0,2 . Mẫu fucoidan của trọng lượng phân tử khác nhau đã được chuẩn bị bởi các ứng dụng của phương pháp thủy nhiệt depolymerization [ 34 ] . Những giá trị này cho mỗi nốt ruồi dư lượng fucose . Trọng lượng phân tử (MW) của fucoidan được tính toán bằng phương pháp sắc ký thấm gel ( cột: TSKgel PWXL ( Tosoh CO , Tokyo, Nhật Bản ) ; pha động ; 0,1 M nano3 tốc độ dòng chảy : 0,5 ml / phút , nhiệt độ cột : 40 ° C ; dò : RI ; hiệu chuẩn : tiêu chuẩn pullulan ) . Xử lý thủy nhiệt của dung dịch nước của fucoidan ở 140 ° C trong 15-60 phút cho các phân tử nhóm trọng lượng fucoidan thấp ( nhóm LMWF ; Mw 6,5-40 kDa ) . Điều trị tương tự như ở 140 ° C trong 5-8 phút cho phân tử nhóm trung gian trọng lượng fucoidan ( nhóm IMWF ; Mw 110-138 kDa ) . Dưới những điều kiện thủy nhiệt, tất cả các mẫu DS duy trì và giá trị DA .

3.3. Chuẩn bị các mẫu chuột mang khối u

Dòng tế bào ung thư ruột kết chuột (dấu hai chấm 26) đã được cung cấp trong khối mô khối u 2 – mm của Bệnh viện Ung thư viện ( Tokyo, Nhật Bản ) . Các khối được nhúng vào ngân hàng tế bào ® ( ZENOAQ , Inc Fukushima, Nhật Bản ) và bảo quản ở -80 ° C cho đến khi sử dụng .

Những con chuột được gây mê với hít 3% -5% isoflurane ( Intervet , Inc , Tokyo, Nhật Bản ) . Các khối mô khối u được giải đông ở nhiệt độ phòng và rửa sạch ba đến bốn lần bằng nước muối . Các khối mô khối u đã được băm nhỏ các khối 1- mm, và miếng của các khối đã được cấy ghép dưới da vào vùng lưng của những con chuột .

Khi các khối u cấy đã tăng lên 10 mm trong kích thước , những con chuột được cho chết do hít phải các 5% isoflurane sau bằng cách vặn cổ . Các mô khối u đã được tuyệt chủng , và áo khoác, microvessels và các mô hoại tử đã được gỡ bỏ . Sau khi được rửa sạch bằng nước muối , các mô khối u đã được băm nhỏ các khối 1- mm và cấy dưới da vào vùng lưng của những con chuột . Chúng tôi sử dụng các mô khối u với số đoạn lớn hơn hai trong các thí nghiệm của chúng tôi .

3.4. Khối u tăng trưởng học

Hai mươi lăm con chuột BALB / c được chọn ngẫu nhiên thành bốn nhóm : nhóm kiểm soát ( kiểm soát, n = 10) , nhóm LMWF ( LMWF , n = 5) , nhóm IMWF ( IMWF , n = 5 ) và nhóm HMWF ( HMWF , n = 5) .

Trừ nhóm kiểm soát, mỗi nhóm được cho ăn Fucoidan 5% ( w / w) fucoidan với một chế độ ăn uống bình thường bột (CE -2 ; CREA Nhật Bản , Osaka, Nhật Bản ) . Fucoidan tất cả những con chuột nhóm ăn được cho ăn khoảng 5 g / kg · ngày của fucoidan . Nhóm đối chứng được cho ăn một chế độ ăn bột bình thường. Trước khi ghép các mô khối u , những con chuột được tạo ra trong 28 ngày bằng cách ăn một chế độ ăn bột có hoặc không có mỗi trọng lượng của Fucoidan. Sau khi được nuôi trong 28 ngày , mỗi con chuột đã trải qua cấy ghép dưới da một miếng mô khối u vào khu vực lưng . Mỗi con chuột đã được cho ăn một chế độ ăn bột có hoặc không có fucoidan trong 14 ngày. Sau đó , tất cả các con chuột được cho chết do hít phải các 5% isoflurane sau bằng cách vặn cổ . Các mô khối u đã được gỡ bỏ và nặng (g) . Sau khi được cân, các mô khối u đã được cố định trong 10% đệm formalin .

3.5. Đánh giá mô bệnh học

Kiểm soát và IMWF các nhóm , phần mỏng (5 mm ) đã được thực hiện từ mỗi mẫu để quan sát mô bệnh học sau khi hematoxylin – eosin (HE ) nhuộm . Mỗi phần đã được kiểm tra bằng kính hiển vi , và số lượng phân chia tế bào trong mỗi khối u đã được tính toán . Việc tính toán phân chia tế bào được thực hiện trong 10 lĩnh vực ở độ phóng đại 400 × sử dụng năm con chuột trong mỗi nhóm. Điểm số trung bình của 50 lĩnh vực được coi là số lượng phân chia tế bào trong mỗi nhóm.

Chúng tôi cũng đã kiểm tra tỷ lệ apoptosis của các mô khối u bằng cách sử dụng thiết bị đầu cuối deoxynucleotidyl transferase qua trung gian deoxyuridine triphosphatate – biotin nick cuối dán nhãn ( Tunel ) nhuộm . Mỗi phần đã được kiểm tra bằng kính hiển vi và số lượng phân chia tế bào trong mỗi khối u đã được tính toán . Việc tính toán phân chia tế bào được thực hiện trong 10 lĩnh vực tại 400 × phóng đại sử dụng bốn con chuột trong mỗi nhóm. Điểm số trung bình của 40 lĩnh vực được coi là số lượng phân chia tế bào trong mỗi nhóm.

3.6. Thời gian sống sót học

Hai mươi bốn con chuột BALB / c được chọn ngẫu nhiên thành bốn nhóm : nhóm kiểm soát ( kiểm soát, n = 4 ) , nhóm LMWF ( LMWF , n = 4 ) , nhóm IMWF ( IMWF , n = 4 ) và nhóm HMWF ( HMWF , n = 4 ) .

Trừ nhóm kiểm soát, mỗi nhóm được cho ăn Fucoidan 5% ( w / w) fucoidan với một chế độ ăn uống bình thường bột (CE -2 ; CREA Nhật Bản , Osaka, Nhật Bản ) . Nhóm đối chứng được cho ăn một chế độ ăn bột bình thường. Trước khi ghép các mô khối u , những con chuột được tạo ra trong 28 ngày bằng cách ăn một chế độ ăn bột có hoặc không có mỗi trọng lượng của Fucoidan. Sau khi được nuôi trong 28 ngày , mỗi con chuột đã trải qua cấy ghép dưới da một miếng mô khối u vào khu vực lưng . Sau khi các mô khối u đã được cấy ghép ( ngày 0) , số ngày cho đến khi các con chuột chết được đo. Sau đó, một đường cong sống sót được tạo ra và thời gian tồn tại trung bình ( ngày ) được tính toán .

3.7. Số đo lách tự nhiên killer T tế bào ( tế bào NK )

Chín con chuột BALB / c được chọn ngẫu nhiên thành ba nhóm: nhóm kiểm soát ( kiểm soát, n = 3) cho ăn một chế độ ăn uống bình thường bột (CE -2, CREA Nhật Bản , Osaka, Nhật Bản ) trong 70 ngày , nhóm IMWF ( IMWF , n = 3) cho ăn một chế độ ăn bột bình thường với 5% ( w / w) IMWF cho 70 ngày và nhóm HMWF ( HMWF , n = 3) cho ăn một chế độ ăn bột bình thường với 5% ( w / w) HMWF cho 70 ngày.

Sau khi sinh sản , tất cả các con chuột được cho chết do hít phải các 5% isoflurane sau bằng cách vặn cổ . Lách được lấy từ mỗi con chuột và splenocytes được thu thập . Hồng cầu đã được gỡ bỏ bằng cách trộn với một bộ đệm ly giải ( 150 mM NH4Cl , 10 nM KHCO3 và 100 mM EDTA) trong 10 phút ở nhiệt độ phòng.

FITC liên hợp chống chuột NKG2A/C/E kháng thể đơn dòng (BD Khoa học sinh học , San Jose, CA) và PE- liên hợp chống chuột CD8a kháng thể đơn dòng (BD khoa học sinh học , San Jose, CA) đã được sử dụng . FITC và kháng thể isotype hợp IgG2a PE- liên hợp đã được sử dụng như điều khiển cho nền nhuộm . Bạch cầu sau đó được nhuộm màu ở 4 ° C sử dụng nồng độ tối ưu được xác định trước của mỗi kháng thể trong 30 phút. Kháng thể ràng buộc được phân tích trên một FACSAria chảy cytometer (BD Biosciences) gating các tế bào với các thuộc tính về phía trước và ánh sáng bên phân tán của tế bào lympho . Tế bào lympho NKG2A/C/E-positive và CD8a âm được coi là tế bào NK . Chúng tôi tính toán tỷ lệ phần trăm của các tế bào NK trong tế bào lympho lách.

3.8. MYD -88 Vòng đấu loại trực Chuột học

Mười MYD -88 chuột loại trực tiếp được chia thành hai nhóm (n = mỗi 5) : các control/Myd-88 ( kiểm soát, n = 5) và các nhóm HMWF/Myd-88 . Nhóm HMWF/Myd-88 được cho ăn 5% ( w / w) fucoidan với một chế độ ăn uống bình thường bột (CE -2 ; CREA Nhật Bản , Osaka, Nhật Bản ) . Nhóm control/Myd-88 được cho ăn một chế độ ăn bột bình thường. Trước khi ghép các mô khối u , những con chuột được tạo ra trong 28 ngày bằng cách ăn một chế độ ăn bột có hoặc không có fucoidan . Sau khi được nuôi trong 28 ngày , mỗi con chuột đã trải qua cấy ghép dưới da một miếng mô khối u vào khu vực lưng . Mỗi con chuột đã được cho ăn một chế độ ăn bột có hoặc không có fucoidan trong 14 ngày. Sau đó , tất cả các con chuột được cho chết do hít phải các 5% isoflurane sau bằng cách vặn cổ . Mô khối u và huyết thanh thu được . Các mô khối u được cân .

Các interleukin huyết thanh (IL ) -2 và IL- 10 cấp độ đã được định lượng bằng cách sử dụng một bánh sandwich enzyme liên kết khảo nghiệm miễn dịch ( ELISA) . IL -2 trong huyết thanh và IL- 10 cấp độ được đo bằng chuột IL-2 và IL- 10 ELISA bộ dụng cụ ( nhiệt KHOA HỌC , Rockford , IL, USA ) theo giao thức của nhà sản xuất .

3.9. Phân tích thống kê

Các dữ liệu được thể hiện như giá trị trung bình ± S.D. Các phân tích thống kê được thực hiện bằng cách sử dụng một chiều ANOVA tiếp theo thử nghiệm Tukey -Kramer hoặc t-test Welch . Chúng tôi thực hiện các bài kiểm tra thứ hạng log để đánh giá thời gian tồn tại của những con chuột khối u. Một giá trị p < 0,05 được xem là có ý nghĩa thống kê.

4 . Kết luận

Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã kiểm tra tác động của uống fucoidan chiết xuất từ ​​Cladosiphon okamuranus tăng trưởng khối u và thời gian tồn tại trong một khối u mang mô hình chuột ruột 26 . Kết quả của chúng tôi chỉ ra rằng uống fucoidan ngăn chặn sự phát triển khối u và kéo dài thời gian tồn tại trong ruột kết 26 con chuột mang khối u. Kết quả của chúng tôi cũng chỉ ra rằng trọng lượng phân tử của fucoidan có thể liên quan đến tác dụng chống khối u của fucoidan .

Hơn nữa , kết quả chỉ ra rằng cơ chế chống khối u cơ bản của Fucoidan có thể bao gồm tăng kích thước của dân số của các tế bào NK và kích thích miễn dịch đường ruột . Những kết quả này cho thấy rằng Fucoidan là một thực phẩm chức năng có lợi cho bệnh nhân ung thư .

Cần xem thêm:

>> Fucoidan chữa ung thư như thế nào?

>> 3 tác dụng chính của Fucoidan


Fucoidan – món quà quý giá từ đại dương trong điều trị ung thư

Trả lời

Email của bạn sẽ không được hiển thị công khai. Các trường bắt buộc được đánh dấu *